Caveolin-1在膀胱尿路上皮癌中的表达及意义(2)
1.2方法1.2.1Caveolin-1蛋白检测采用免疫组化SP法。鼠抗人Caveolin-1单克隆抗体购于美国基因公司,工作浓度为1∶400；兔抗鼠血清及S-P试剂盒为北京中山生物有限公司产品；DAB为Sigma公司产品。用已知肺癌阳性切片作阳性对照，用鼠抗人Caveolin-1单克隆抗体作阴性对照，DAB显色；苏木精复染；中性树脂封片。具体操作步骤按试剂盒说明书进行。
1.2.2Caveolin-1核酸原位杂交使用Oligo软件设计Caveolin-1基因寡核苷酸探针，由上海生工生物技术服务有限公司合成。Caveolin-1寡核苷酸探针序列为5-CTCAG CCAAT AAAGC GATGG A-3，探针片段长度21 bp，3端标记地高辛。试验严格按说明书进行,原位杂交阳性对照片由试剂盒提供,省去探针步骤为阴性对照。最后用DAB显色,镜下观察,Caveolin-1 mRNA阳性细胞为胞质内棕黄色颗粒。
1.2.3结果判定采用半定量分析方法(AB值法)，每张切片随机选择5个高倍视野,每视野计数200个细胞(癌组织计数癌细胞,正常膀胱黏膜组织计数上皮细胞)。胞浆或胞膜呈棕黄或棕褐色者为阳性细胞 ......
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