HBV感染者精液HBV—DNA载量的相关影响因素研究(1)
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[摘要] 目的 分析乙型肝炎病毒(HBV)感染者精液内HBV-DNA载量的影响因素，寻求阻断HBV传播的方法。 方法 收集189例HBV感染者血液与精液标本，采用荧光定量PCR分别测定HBV-DNA载量，同时计数精液内血细胞数量。 结果 HBV感染者精液HBV-DNA载量低于血液HBV-DNA载量；血清HBV-DNA载量不同，精液HBV-DNA阳性检出率差异有统计学意义(χ2=74.32，ν=2，P < 0.005)；当精液内血细胞数量增多时，精液HBV-DNA阳性检出率差异有统计学意义(χ2=28.45，ν=2，P < 0.005)。 结论 血清HBV-DNA载量是影响精液HBV-DNA载量的主要因素，而造成精液血细胞增多的疾病能增加血液HBV-DNA渗漏到精液内。
[关键词] 乙型肝炎病毒；精液；荧光定量PCR；影响因素
[中图分类号] R512.6+2 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721(2013)01(c)-0006-03
乙型肝炎病毒(hepatitis B virus，HBV)经精液传播已经被证实[1-4]。HBV男性感染者精液及其内的生殖细胞成为HBV父婴垂直传播的重要介质，HBV感染生殖细胞垂直感染子代，同时精液内HBV通过水平传播的方式感染配偶，再经过妇婴垂直传播方式亦可感染子代[5]。HBV感染者精液HBV-DNA载量高低与性伴侣间的水平传播、父婴垂直传播危险性密切相关。目前针对HBV治疗尚缺乏可靠有效的药物，而切断经由精液传播的途径进行预防成为控制HBV危害的有效措施。本文采用实时荧光PCR检测血液与精液HBV-DNA载量，用精液分析仪计数精液内血细胞数量，旨在研究分析影响精液HBV-DNA载量的各种相关因素，为进一步减少或消除精液HBV-DNA载量，切断经精液传播途径提供理论支持。
1 资料与方法
1.1 一般资料
选择2009年3月～2012年7月在本院就诊男性患者189例，年龄21～47岁，平均34岁；检测筛选HBV血清标志物HbsAg均为阳性，其中丙氨酸氨基转移酶>100 U/L患者3例，丙氨酸氨基转移酶40～100 U/L患者12例，其余患者肝功能生化指标均正常。无菌采集静脉血2～3 mL，分离血清- 20℃冰冻保存。同时用无菌试管采集精液1～4 mL放置37℃液化，进行精液分析后于-20℃冰冻保存备用。
1.2 试验方法
1.2.1 精液常规分析 取已经液化的精液用精液分析仪进行分析，计数精子数量、活动性各项精子参数，同时计数精液内WBC、RBC数量，两者之和计为血细胞总数。精液分析仪为北京伟力公司WLJY-9000型精液分析仪。
1.2.2 实时荧光PCR检测HBV-DNA定量 精液标本复溶后离心，将精子与精浆分离，精子以PBS洗3～5次，末次洗液PCR检测HBV-DNA阴性，以PBS稀释精子，调节精子浓度30×106个/mL，将精浆与精子分别保存备用。
将上述制备的精浆、精子及血清各100 μL移入0.5 mL小试管，加入100 μL提取液，按照说明书操作，提取HBV-DNA，然后进行实时荧光PCR扩增试验，对HBV-DNA检测定量。HBV荧光定量PCR检测试剂购自深圳凯杰公司，PCR仪为FTC-2000全自动荧光定量PCR分析仪。HBV-DNA检测下限为5.0×102 copies/mL，以标本检测数值>1.0×103 copies/mL判为阳性。
1.3 统计分析
应用SPSS 13.0 软件进行数据处理和统计。分析计量资料以均数描述，计数资料以例数表示，计数资料比较采用χ2检验，以P < 0.05为差异有统计学意义。3组间两两比较以P < 0.017为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 血清、精浆、精子内HBV-DNA载量
共检测189例HBV感染者，分别对其血清、精浆、精子内HBV-DNA检测定量，精液常规分析，对精液内WBC、RBC进行计数。血清HBV-DNA检测阳性112例，载量范围位于1.00×103～8.91×108 copies/mL之间，均值8.52×105 copies/mL；精浆内HBV-DNA检测阳性71例，载量范围在1.00×103～9.51×105 copies/mL之间，均值6.43×103 copies/mL，HBV感染者精浆内HBV-DNA载量明显低于血清HBV-DNA载量；精子HBV-DNA检测阳性仅4例，均值为1.43×103 copies/mL，其中3例血清载量均>1 ......
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