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编号:13174486
基于ITS2条形码SNPs的人参和西洋参PCR SSCP分子鉴别研究(2)
http://www.100md.com 2012年12月15日 《中国中药杂志》 2012年第24期
     1.6 DNA序列测定 PCR扩增产物由上海生工生物技术公司测序,在NCBI网站进行BLAST比对,并将所有样品测序结果采用DNAMAN软件进行序列比对,验证特异位点。

    2 结果

    2.1 DNA提取 将提取纯化的人参和西洋参总DNA经琼脂糖凝胶分析,DNA降解较为严重,见图1。

    2.2 引物 从GenBank上下载的人参和西洋参的ITS2序列,经DNAMAN调整后序列比对,人参和西洋参在第28碱基处和第39碱基出现C→T转换,将这2个位置定义为人参和西洋参的特异位点。由于PCR-SSCP分析的适宜长度为200 bp左右,因此采用Primer Premier 5.0软件设计出扩增产物包含特异位点的引物,上游引物SF 5′-CAGAATCCCGTGAACCA-3′,下游引物SR 5′-CCGCACGACATGAGAAG-3′,产物长度248 bp。

    2.3 PCR扩增 人参和西洋参的样品R1~R11 ......
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